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产品名称 | 肺癌细胞；A549[A-549] |
生长特性 | 贴壁生长 |
货号 | EY-X63216 |
细胞名称 肺癌细胞；A549[A-549]
形态特性: 上皮样；多角形
生长特性: 贴壁生长
特征特性: 该细胞系是1972年由GiardDJ通过肺癌组织移植培养建系的，源自一位58岁的白人男性。A549能通过胞苷二磷脂酰途径合成富含不饱和脂肪酸的；角蛋白阳性。
培养条件: McCoy's5AMedia(ModifiedwithTricine)10%FBS
传代方法: 1:3~1：8传代；每周2~3次。
传代情况: C5
冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测: 培养法（-）
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产品特点:
1、 使用方便:不需昂贵设备。
2、 可以处理各种细菌菌体，包括新鲜菌液和冰冻菌体。
3、 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
4、 采用温和的中性裂解组分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
6、 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
7、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本试剂盒中不有EDTA，与金属螯和层析等兼容。
培养操作步骤 ：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
操作流程：
1.1主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生的细胞，以0.25％消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ，计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生的细胞用消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。
皮肤成纤维细胞；CCC-HSF-1形态特性: 成纤维细胞样生长特性: 贴壁生长Human Ghrelin ELISA KIT纤维肉瘤细胞；HT-1080形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Mouse TRANCE ELISA KIT耐VP16绒癌细胞株；JEG-3/VP16形态特性: 上皮样；多角生长特性: 贴壁生长Human EGF ELISA KIT
TNFa转染耐VP16绒癌细胞；JEG-3-VP16-TNFa形态特性: 上皮样；多角生长特性: 贴壁生长Bovine Cyclooxygenase 2 (COX2) ELISA Kit
神经母细胞瘤细胞；BE(2)-M17形态特性: 神经母细胞样生长特性: 贴壁生长Human IL-17 ELISA KIT
癌细胞；MDA-MB-157形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Human IL-1RA ELISA KIT
小鼠胚胎成纤维细胞；MEF形态特性: 成纤维细胞样生长特性: 贴壁生长Rat CRP ELISA KIT
犬肾细胞；MDCK(NBL-2)形态特性: 上皮样；多角生长特性: 贴壁生长Human eNOS ELISA KIT
成骨肉瘤细胞；MG-63形态特性: 成纤维细胞样生长特性: 贴壁生长Bovine CD73/5'-Nueleotidase ELISA Kit
大鼠垂体瘤细胞；MMQ形态特性: 上皮样生长特性: 悬浮生长Human IL-6Rα ELISA KIT
小细胞肺癌细胞；NCI-H446形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁/悬浮生长，混合Human Amyloidβ-peptide ELISA KIT
多发性骨髓瘤细胞；RPMI-8226[RPMI8826]形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 悬浮生长Human IL-5 ELISA KIT
脑瘤细胞；SF17形态特性: 其他生长特性: 悬浮生长Mouse TGF-β 1 ELISA KIT
神经母细胞瘤细胞；SK-N-SH形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Mouse IL-2 ELISA KIT
肝癌细胞；SMMC-7721形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Rat IFN-γ ELISA KIT
羊膜细胞；WISH形态特性: 上皮细胞样生长特性: 贴壁生长Mouse IL-4 ELISA KIT
肺癌细胞；A549[A-549]小鼠抗中性粒/中心体抗体(ACA)ELISA试剂盒5HTELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠促黄体激素(LH)ELISA试剂盒5HTELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠绒毛膜(CG)ELISA试剂盒5HTELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠C肽(C-Peptide)ELISA试剂盒5HTELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠胰岛素(INS)ELISA试剂盒5-LO/LOXELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠新生甲状腺素(NN-T4)ELISA试剂盒5-NTELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠游离*状腺原氨(Free-T3)ELISA试剂盒5-NTELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠游离甲状腺素(FT4)ELISA试剂盒5-NTELISAKit产品规格:48T/96T。
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