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产品名称 | 小鼠胚胎成纤维细胞(来自NIH3T3)；PA12 |
生长特性 | 贴壁生长 |
货号 | EY-X63238 |
细胞名称 小鼠胚胎成纤维细胞(来自NIH3T3)；PA12
形态特性: 成纤维细胞样
生长特性: 贴壁生长
特征特性: 该细胞来自NIH/3T3，可作逆转录病毒的包装细胞。
培养条件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
传代方法: 1:3传代；3~4天1次。
传代情况: C5
冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测: 培养法（-）
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产品特点:
1、 使用方便:不需昂贵设备。
2、 可以处理各种细菌菌体，包括新鲜菌液和冰冻菌体。
3、 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
4、 采用温和的中性裂解组分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
6、 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
7、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本试剂盒中不有EDTA，与金属螯和层析等兼容。
培养操作步骤 ：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
操作流程：
1.1主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生的细胞，以0.25％消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ，计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生的细胞用消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。
人外周血B淋巴细胞；IM-9形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 悬浮生长Mouse GAS6 ELISA KIT
人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞；NK-92MI[NK92MI]形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 悬浮生长羊白介素6（Sheep IL-6）Elisa试剂盒
人肝腹水腺癌细胞；SK-HEP-1形态特性: 上皮细胞样生长特性: 贴壁生长Human GFAP ELISA KIT
人肺癌细胞；TKB-1形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Human pro-BDNF ELISA KIT
人胚肺成纤维细胞；WI-38[WI38]形态特性: 成纤维细胞样生长特性: 贴壁生长Rabbit BMP5 ELISA Kit
非洲绿猴肾细胞；GL-37形态特性: 生长特性: 贴壁生长Human CD258 ELISA KIT
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人胎儿胸腺细胞株；HFT-8810[HFT8810]形态特性: 生长特性: 贴壁生长Human SCGN ELISA KIT
人肝癌细胞；HB611形态特性: 上皮细胞样生长特性: 贴壁生长Human BMP-4 ELISA KIT
小鼠白血病细胞；P388形态特性: 生长特性: 贴壁生长Human NGF R ELISA KIT
人脐静脉内皮细胞（人膀胱癌细胞污染）；ECV-304[ECV304；ECV304]形态特性: 生长特性: 悬浮生长Human BMP-5 ELISA KIT
牛肾细胞；MDBK(NBL-1)形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Human UPAR ELISA KIT
人肝癌细胞；PLC/PRF/5形态特性: 上皮细胞样生长特性: 贴壁生长Human NT-3 ELISA KIT
牛陀螺状细胞；BT形态特性: 生长特性: 贴壁生长Human FGFR2 ELISA KIT
恒河猴肾细胞；LLC-MK2形态特性: 生长特性: 贴壁生长Mouse IL-33R ELISA KIT
人恶性胚胎横纹肌瘤细胞；RD形态特性: 梭型和大的多核细胞生长特性: 贴壁生长Mouse IgG3 ELISA KIT
小鼠胚胎成纤维细胞(来自NIH3T3)；PA12小鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA试剂盒AMAELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠黑色素细胞抗体(MCAb)ELISA试剂盒AMAELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠血管紧张素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA试剂盒AMAELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠细胞色素C(Cyt-C)ELISA试剂盒AMAELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠白三烯C4(LTC4)ELISA试剂盒AMAELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠胰淀素(Amylin)ELISA试剂盒AmylinELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠低氧诱导因子1α(HIF-1α)ELISA试剂盒ANAELISAKit产品规格:48T/96T。
小鼠可溶性白细胞分化抗原86(B7-2/sCD86)ELISA试剂盒ANAELISAKit产品规格:48T/96T。
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