细胞名称 胚肺二倍体细胞；KMB-17
形态特性: 成纤维细胞样
生长特性: 贴壁生长
特征特性: 来自于4周龄女孩胚胎，1975年中国医学科学院昆明医学生物学研究所建立；可作为转染宿主，用于肺损伤或分化的研究。
培养条件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)新生牛血清，10%；水解乳蛋白，10%
传代方法: 1：2-1：4
传代情况: P10
冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测: 培养法（-）
公司细胞广泛用于国内院校的细胞生物学研究，作为实验项目研究。下列产品详细介绍：
产品名称 | 生长特性 | 货号 |
胚肺二倍体细胞；KMB-17 | 贴壁生长 | EY-X63452 |
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冷冻保存细胞之方法
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
操作步骤:
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除细胞消化液。加入含血清的 *细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除细胞消化液后，加入含血清的*培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
rrCXCL3/CINC-2b, CF (25 UG)细胞名称: 猫肾细胞；CRFK MEM-
酚红Jak2 (D2E12) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)甲基三丁基化铵
环贝特CD44 (156-3C11) Mouse mAb (Biotinylad)2-溴酰溴
曙红Y(水溶)TCL1 Antibody2-溴吡
偶氮胭脂红BBAP31 Antibody2-二环己基-2,4,6-三异基联
偶氮胭脂红GHEF1/NEDD9 (2G9) Mouse mAb2-二-叔丁膦基-2',4',6'-三异基联
荧光桃红B,酸性红92GCN2 (E9H6C) Rabbit mAbBoc-L-beta-高
依莱铬红BWWOX Antibody奎尼丁
固红RLWWOX Antibody基磺酰
固红紫色LB盐hnRNP A0 Antibody2-溴代异戊酸
苋菜红ACSL1 Antibody(S)-(-)-2-甘氨
丽春红4R,新胭脂红,亮丽春红5R,酸性红18M-Cadherin (D4B9L) Rabbit mAb5-氨基-2-溴嘧啶
酚藏花红M-Cadherin (D4B9L) Rabbit mAb2-苄基酸
天狼星玫红，BBTHEX1 Antibody对甲氧基基酚
钌红Tris-Glycine SDS Running Buffer (10X) 5-氨基-2-氟甲酸
藻红B,四荧光素Phospho-Akt (Ser473) (587F11) Mouse mAb没有中文名
酸性红88 Phospho-Akt (Ser473) (587F11) Mouse mAb氟-2-
酸性红183THEX1 (D2B4) Rabbit mAb(S)-羟基丁酸酯
酸性红9PKM2 (D78A4) XP® Rabbit mAbL-谷氨酰
孔雀石绿PKM2 (D78A4) XP® Rabbit mAbL-赖氨酸
灿烂绿,亮绿Phospho-Drosophila Akt (Ser505) Antibody6-甲氧基-2,3,4,5-四氢吡啶
甲基绿THEX1 (D66A11) Rabbit mAb2,二-5-甲基吡啶
茜素绿;酸性绿25Phospho-Akt (Thr308) (244F9) Rabbit mAb(R)-缩水甘油
萘酚绿BPhospho-Akt (Thr308) (244F9) Rabbit mAb氧甲酰基亚基三基膦
固绿FCFPhospho-Akt (Ser473) (193H12) Rabbit mAb甲酸
子种绿A；蓝APhospho-Akt (Ser473) (193H12) Rabbit mAb2-甲氧基基酸
亮绿SF(淡黄)Phospho-Akt (Ser473) (193H12) Rabbit mAb甲氧基酸
健那绿BAkt3 Antibody2,3,4,6-四酰氧基-alpha-D-吡喃葡萄糖溴化物
酸性绿3CNOT3 (D4K4N) Rabbit mAb1-叔丁氧羰基哌
酸性绿 50 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb-2-吡啶甲酸
酸性绿APhospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb2-溴蒽醌
Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAbN-BOC-GAMMA-氨基丁酸
靛蓝N-Cadherin Antibody9-溴菲
甲基蓝CD6 (E9Y7Y) Rabbit mAb戊钠
伊文思蓝；埃文斯蓝MST3b Antibody2-氨基--6-甲氧基嘧啶
曲利蓝LSD1 (1B2E5) Mouse mAb5--2-氟
维多利亚蓝B,性蓝 26CXXC1 (D1R5R) Rabbit mAb2-溴-5-氟
胚肺二倍体细胞；KMB-17人5核苷酶(5-NT)ELISA试剂盒LHELISAKit产品规格:48T/96T。
人腺嘌呤二核苷磷(NADPH)ELISA试剂盒LHELISAKit产品规格:48T/96T。
人L丙氨解氨酶(PAL)ELISA试剂盒LHRHELISAKit产品规格:48T/96T。
人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA试剂盒LHRHELISAKit产品规格:48T/96T。
人α2抗纤溶酶(α2-AP)ELISA试剂盒LHRHELISAKit产品规格:48T/96T。
人α2纤溶酶抑制物(α2-PI)ELISA试剂盒LIFELISAkit产品规格:48T/96T。
人αL艾杜糖苷酶(IDUA)ELISA试剂盒LIFELISAKit产品规格:48T/96T。
人αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)ELISA试剂盒LIFELISAkit产品规格:48T/96T。
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