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产品名称 | SV40转染成骨细胞；hFOB1.19 |
生长特性 | 贴壁生长 |
货号 | EY-X63492 |
细胞名称 SV40转染成骨细胞；hFOB1.19
形态特性:
生长特性: 贴壁生长
特征特性: 在0.6mg/mlG418存在下，用温度敏感的表达载体pUCSVisA58转染自然流产的胎儿四肢组织，建立了此细胞系。在许可温度33.5oC下细胞分裂很快，而在限制温度39.5oC下细胞极少分裂或不分裂。这些细胞具有分化为表达造骨细胞表型的成熟造骨细胞的能力。这些细胞提供了一个同质化的快速增殖模型系统，用于研究正常人造骨细胞的分化，造骨细胞生理和激素，生长因子，和对造骨细胞的功能及分化有影响的细胞因子。
培养条件: DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)优质胎牛血清，10%；0.3mg/mlG418
传代方法: 消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。
传代情况: PN5
冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测: 阴性
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产品特点:
1、 使用方便:不需昂贵设备。
2、 可以处理各种细菌菌体，包括新鲜菌液和冰冻菌体。
3、 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
4、 采用温和的中性裂解组分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
6、 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
7、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本试剂盒中不有EDTA，与金属螯和层析等兼容。
培养操作步骤 ：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
操作流程：
1.1主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生的细胞，以0.25％消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ，计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生的细胞用消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。
rmIL-17 RD/SEF (50 UG)细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞；HBKC-57 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-17 RC, CF (50 UG)细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞；HBMY-904 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-17 R/Fc, CF (100 UG)细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞；HBS6F1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-15Ra/Fc, CF (100 UG)细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞；HBCEP16-2B RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-15, CF (10 UG)细胞名称: 中国仓鼠卵巢细胞（亚系克隆）；CHO1beta9,12.5Clone36 DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)10%FBS
rmIL-15 (10 UG)细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞；HBCEP24G-9G4 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-13, CF (5 UG)细胞名称: 叙利亚仓鼠细胞系；SyrianHamsterAV12 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
rmIL-13, CF (25 UG)细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞；HBBrE-1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-13 Ra2/Fc, CF (100 UG)细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞；HBBFR87-124 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-13 Ra1/Fc, CF (200 UG)细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞；HBPBA5 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-13 Ra1/Fc (200 UG)细胞名称: 中国仓鼠卵巢细胞（亚系克隆）；CHODUXB11CarryingpBSCRLc/pTCSgptclone35.6 DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)10%FBS
rmIL-13 (5 UG)细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞系；L/1C2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-13 (25 UG)细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞；HBBFR87-70 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-12, CF (50 UG)细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞；HB9.4 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-12, CF (10 UG)细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞；HBG17-2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-12 Rb1, CF (50 UG)细胞名称: 小鼠杂交瘤细胞；HB9.6 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
SV40转染成骨细胞；hFOB1.19人基质γ羧基谷氨蛋白(MGP)ELISA试剂盒NGALELISAKit产品规格:48T/96T。
人甘露糖结合蛋白/甘露糖结合凝集素(MBP/MBL)ELISA试剂盒NGBELISAKit产品规格:48T/96T。
人白细胞弹性蛋白酶(HLE)ELISA试剂盒NGBELISAKit产品规格:48T/96T。
人成骨生长肽(OGP)ELISA试剂盒NGBELISAKit产品规格:48T/96T。
人硫氧化还原蛋白(Trx)ELISA试剂盒NGBELISAKit产品规格:48T/96T。
人硫氧还蛋白还原酶(TrxR)ELISA试剂盒NGFELISAkit产品规格:48T/96T。
人蛋白磷酶(PP)ELISA试剂盒NGFELISAkit产品规格:48T/96T。
人卵清蛋白特异性IgE(OVAsIgE)ELISA试剂盒NGFELISAKit产品规格:48T/96T。
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