白垩立克次氏体PCR试剂盒步骤注意事项：
1．基础程序；
2．扩增温度和延伸温度；
3．反应时间；
4．循环次数；
5．PCR 反应液的配制；
6．PCR技术的基本原理；
7．PCR的反应动力学；
8．PCR扩增产物；
9．PCR反应体系与反应条件。
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以下是白垩立克次氏体PCR试剂盒步骤的详细说明书：
产品名称 | 白垩立克次氏体PCR试剂盒步骤 |
英文名称 | Rickettsia gravesiiPCR |
编号 | EY00P1104 |
使用方法：
注：白垩立克次氏体PCR试剂盒步骤所有试剂使用前需*解冻，混合均匀，6,000rpm离心数秒后使用。
1. 样本处理（样本处理区）
待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等，具体提取方法请参照相关说明书；阳性质控品及阴性质控品无需提取，可直接使用。
2. 扩增试剂准备（PCR前准备区）
取N个（N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品）PCR反应管，每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量，两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。
组分每头份用量FMD RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。
1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s，转移至样本处理区。
2.加样（样本处理区）
3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl，盖紧管盖，于6,000rpm离心10s，转移至扩增区。
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原代内皮细胞培养特制添加剂Many types of cells包装：5/2.5/1ml
IL20RB Others Rat 大鼠 IL20RB 人细胞裂解液 (阳性对照)
大鼠子宫平滑肌细胞*培养基 100mL
CHO-K1仓鼠卵巢细胞亚株 CHO-K1 Chinese hamster ovary cell subline F-12K+10%FBS
胰岛素样生长因子
E.G7-OVA(小鼠T淋巴瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 人卵巢成纤维细胞HOF
RDFs, 大鼠真皮成纤维细胞 Rattus
CM-H048人胃粘膜上皮细胞*培养基100mL
大鼠脑膜细胞(RMC)(5×105)
小鼠神经母细胞瘤细胞;Neuro-2a [N2a; Neuro-2a] 小鼠卵巢颗粒细胞*培养基 100mL
人肝永生化细胞;THLE-3
FGFR1 Others Mouse 小鼠 FGFR1 / CD331 人细胞裂解液 (阳性对照)
人肠静脉内皮细胞*培养基 100mL
人小肠平滑肌细胞*培养基 100mL
人结肠平滑肌细胞*培养基 100mL
人直结肠平滑肌细胞*培养基 100mL
卵黄多粘菌素琼脂基础（MYP） 英文名称； Mannitol-Egg-Yolk-Polymyxin Agar Base 规格； 250g
胰酪胨大豆多粘菌素肉汤基础 英文名称； Trypticase-Soy-Polymyxin Broth Base 规格； 250g
改良V-P培养基 英文名称； V-P Medium,Modified 规格； 250g
胰酪胨大豆羊血琼脂基础 英文名称； Trypticase Soy Sheep Blood Agar Base 规格； 250g
酪蛋白琼脂 英文名称； Casein Agar 规格； 250g
假单胞cfc选择性培养基 Pseudomonas CFC Selective Agar 250g
可溶性淀粉培养基 Soluble Starch Medium 250g
AK琼脂（2号） AK Agar（No.2） 250g
牛肝颗粒 100g
运动发酵单胞菌T培养基 Zymomonas Mobilis T Medium 250g
白垩立克次氏体PCR试剂盒步骤RVS肉汤 用于食品中沙门氏菌检验选择性增菌(ISO标准)用途:用于沙门氏菌的选择性增菌培养。用法称取本品 27.1g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中,充分混匀,分装,121℃高压灭菌 15 分钟,保存于 4 -10℃冰箱,备用。注:放置于 42℃水浴培养。
MKTTn肉汤（ISO） 用于食品中沙门氏菌检验选择性增菌(ISO标准)用途:用于食品中沙门氏菌选择性增菌培养。用法称取本品 89.5g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,迅速冷却,此溶液在 2-8℃可保存 4 周,临用前加入 20ml液(5g 溶解于 2ml蒸馏水,然后加入 4g ,加蒸馏水至 20ml),混匀,分装试管,每管 10ml,当天制备当天使用,无需高压灭菌。
赖氨酸铁琼脂（LIA） 用于食品中沙门氏菌生化试验(FDA标准)用途:用于同时检测肠杆菌科细菌的赖氨酸脱羧酶和产试验,特别用于检测沙门氏菌和亚利桑那菌。用法称取本品 32.0g ,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装于 13x100mm 试管中,每管4ml。121℃高压灭菌 15 分钟,冷至 60℃时,制成斜面,斜面长 2.5cm,底部长 4cm。
改良MSRV培养基 用于沙门氏的分离培养（MERCK方法）用于沙门氏的分离培养（MERCK方法）产品用法：称取本品 32.0g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,煮沸1 分钟,冷至 50℃左右时, 每 200ml 培养基中加 1 支改良 MSRV 添加剂(新生霉素 2mg),混匀,倾入无菌平皿,备用。使用时,正置培养,采用点触法接种。注：无需高压灭菌。贮存方法：请放置阴凉干燥处保存
需要自备的器材：
1．白垩立克次氏体PCR试剂盒步骤仪器：分析天平、离心机、荧光 PCR 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器（2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：荧光 PCR 反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸二乙酯（DEPC）水
处理的灭菌离心管、吸头（10 µL、200 µL、1000 µL）、灭菌双蒸水。
特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板，操作简单，定量准确快速。
2. 引物经过优化，特异性强。预期的 PCR 产物长度为 560 bp。
3. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
4. 提供阳性对照，便于分析试验结果。
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