实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
公司细胞广泛用于国内院校的细胞生物学研究，作为实验项目研究。下列产品详细介绍：
产品名称 | 生长特性 | 货号 |
SV40T转化的人胚肾细胞（亚系）；293T/17 | 贴壁生长 | EY-X63369 |
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细胞名称 SV40T转化的人胚肾细胞（亚系）；293T/17
形态特性: 上皮样
生长特性: 贴壁生长
特征特性: 该细胞来源于表达SV40T抗原的293T细胞；可以产生高滴度的有感染性的逆转录病毒。
培养条件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS；4mML-glutamine
传代方法: 1:4~1:8传代；2~3天换液1次。
传代情况:
冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测: 培养法（-）
冷冻保存细胞之方法
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
操作步骤:
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除细胞消化液。加入含血清的 *细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除细胞消化液后，加入含血清的*培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
人正常主气管上皮细胞；HNTEC/HL-013形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Anti-ALYREF Polyclonal Antibody
人正常眼睑上皮细胞；HNEEC/HL-015形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Anti-TLR2 Polyclonal Antibody
小鼠正常食管上皮细胞；MNEEC/HL-009形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Anti-HPSE Polyclonal Antibody
大鼠正常皮肤角质细胞；RNSK/HL-010形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Anti-PIN1 Polyclonal Antibody
大鼠正常食管上皮细胞；RNEEC/HL-011形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Anti-NGB Polyclonal Antibody
大鼠正常食管上皮细胞；RNEEC/HL-012形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Anti-TERF1 Polyclonal Antibody
乙型肝炎病全基因组转基因人肝细胞系；HL02-H1形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Anti-Phospho-PRKACA-T197 Polyclonal Antibody
杂交瘤细胞株；H3N2-CIV-HA-2C5形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 悬浮生长Anti-PDK3 Polyclonal Antibody
杂交瘤细胞株；A135形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 悬浮生长Anti-UBE2T Polyclonal Antibody
杂交瘤细胞株；AFM1/3D8形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 悬浮生长Anti-ATP6V1B1 Polyclonal Antibody
杂交瘤细胞株；AFB1/3B9形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 悬浮生长Anti-AGO2 Polyclonal Antibody
人支气管细胞系；HBE-TT形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Anti-GPI Polyclonal Antibody
人脐静脉内皮细胞系；HUVEC-T/T形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Anti-NCOR1 Polyclonal Antibody
杂交瘤细胞株；XX形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 悬浮生长Anti-PTPRN Polyclonal Antibody
杂交瘤细胞株；2D1C11形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 悬浮生长Anti-RPL11 Polyclonal Antibody
人喉癌细胞；Hep-2NS2形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Anti-FMR1 Polyclonal Antibody
SV40T转化的人胚肾细胞（亚系）；293T/17牛乙酰乙检测(ACAC)ELISA试剂盒HBeAbELISAKit产品规格:48T/96T。
牛锌金属硫蛋白(Zn-MT)ELISA试剂盒HBeAgELISAKit产品规格:48T/96T。
牛分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA试剂盒HBFELISAKit产品规格:48T/96T。
牛主要组织相容性复合体(MHC/BoLA)ELISA试剂盒HbHELISAKit产品规格:48T/96T。
鸡可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISA试剂盒HBsAbELISAKit产品规格:48T/96T。
鸡1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βDglucosidase)ELISA试剂盒HBsAbELISAKit产品规格:48T/96T。
鸡白介素17(IL-17)ELISA试剂盒HBsAgELISAKit产品规格:48T/96T。
鸡神经胶质纤维性蛋白(GFAP)ELISA试剂盒HBsAgELISAKit产品规格:48T/96T。
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